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- 產(chǎn)品名稱： Exonuclease III
- 產(chǎn)品貨號： CSRE0118
- 貨期： 現(xiàn)貨
- 價(jià)格與訂購： 200
- 數(shù)量：
庫存： 50
- 規(guī)格： 5 KU
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購
產(chǎn)品描述
Exonuclease III 是一種核酸外切酶，該酶作用于雙鏈 DNA，從 3'OH 末端方向逐步切去單核苷酸。該酶最適 底物是平末端或 5'末端突出的 DNA，但也可以作用于雙鏈 DNA 切刻位點(diǎn)產(chǎn)生單鏈缺口。由于對單鏈 DNA 無 活性，因此該酶難以切割 3'突出末端。3'到 5'外切酶活性對底物的消化程度隨 3'突出末端的長度而變化，四堿 基或更長的突出末端難以被切割。這種特性可以用于生產(chǎn)特定方向的單鏈 DNA，將線性化 DNA 設(shè)計(jì)成為一端 為不切割末端（3'突出端），另一端則設(shè)計(jì)為易切割末端（平端或 5'突出端），此時(shí) Exonuclease III 將僅消化一 條鏈。
Exonuclease III 的活性部分依賴 DNA 雙螺旋結(jié)構(gòu)，并根據(jù)序列的不同而有差異（C＞A=T＞G）。此外，該酶也 有 RNase H、3’-磷酸酶、脫嘌呤/嘧啶（AP）位點(diǎn)特異性核酸內(nèi)切酶活性。
產(chǎn)品組分
核酸外切酶濃度：100U/μL
保存條件
-30 ~ -15℃保存。運(yùn)輸條件：≤0℃。
單位定義
一個(gè)酶活單位 (U) 的定義是以雙鏈 DNA 為底物在 37℃下孵育 30 min，生成 1 nmol 的酸可溶性物所需的酶量。
適用場景
（1）單向嵌套缺失；
（2）定點(diǎn)突變；
（3）單鏈特異性探針的制備；
（4）雙脫氧測序用單鏈底物的制備。
使用方法
（1） 按如下建議配制體系反應(yīng)液（冰上操作）：
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DNA
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~5 μg
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10×Exo III Buffer
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5 μl
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Exonuclease III
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0.5 μl
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Nuclease-Free Water
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To 50 μl |
（2）37℃孵育 30 min；
（3）加入終濃度為 11 mM 的 EDTA 終止反應(yīng)或 70℃孵育 30 min 使 Exonuclease III 失活；
（4）瓊脂糖電泳檢測雙鏈 DNA 酶切結(jié)果。
注意事項(xiàng)
Exonuclease III 不能切割硫代磷酸酯鍵。因此，也可以通過引入一個(gè) α-硫代磷酸核苷酸將 DNA 分子的一端保護(hù)起來，以進(jìn)行單向切割。這種特性可以用于對一端為鈍化末端（3’突出端），另一端是敏感末端（平端或 5’突出端）的線性 DNA 分子進(jìn)行單方向切割。
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Note
For research use only .
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